Cet atelier a pour but de familiariser les participants à l’étude fonctionnelle des mitochondries ; un accent particulier sera mis sur les relations "flux-forces". Il s’étalera sur trois jours (une demi-journée et deux journée pleines). Quelques exposés théoriques seront consacrés à des rappels fondamentaux et méthodologiques concernant l’activité de la chaîne respiratoire, le potentiel de membrane et la synthèse de l’ATP, ainsi que leur mesure dans différentes conditions. La partie expérimentale sera distribuée sur 4 demi-journées.
Les points suivants seront abordés : préparation de mitochondries isolées de muscle squelettique ; dissection et préparation de fibres musculaires ; mesure oxygraphique et spectrophotométrique de l’activité respiratoire des mitochondries isolées de levure ; mesure oxygraphique de l’activité respiratoire de fibres musculaires perméabilisées ; mesure par fluorimétrie du potentiel de membrane ; oxydation du NADH par les mitochondries isolées de levure (couplage énergétique, discrimination entre déshydrogénases externe et interne), mesure spectrophotométrique de la synthèse de l’ATP par un système enzymatique couplé. Enfin, une session finale sera consacrée à l’analyse et l’interprétation des résultats.

Organisateurs : Nicole Averet ; Véronique Trézéguet ; Frédéric Bouillaud ;Gilles Gouspillou ; Francis Haraux ; Guy Lauquin ; Michel Rigoulet ; Vladimir Veksler.

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Documentation

Présentation MR
Présentation FH
Résultats atelier A
Protocole : isolement des mitochondries de levure (NA)
Présentation FH
Bilan atelier